計數顯色培養基的用法及用量說(shuō)明
計數顯色培養基是一類(lèi)利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來(lái)檢測微生物的新型培養基。它是一種新型分離培養基,利用顯色培養基進(jìn)行微生物的篩選分離,其反應的靈敏度和特異性大大優(yōu)于傳統培養基。這些相應的顯色底物是由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成,在特異性酶作用下,游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色,直接觀(guān)察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。
計數顯色培養基復蘇菌種前應準各適于該菌種生長(cháng)的固體、液體培養基和培養設備,所有操作均應在符合生物安全保護及無(wú)菌條件下進(jìn)行。啟開(kāi)菌種宜采用鋸開(kāi)法(鋸開(kāi)前用75%酒精棉消毒菌種管外壁)。用吸管將液體培養基0.3ml左右注入被啟開(kāi)的菌種安瓶中并吹打,使安瓶中的凍干菌種溶解成菌懸液。
將上述菌懸液全部吸出,分別接種到固體斜面和液體培養管中,一般放置在37℃培養箱培養18~24小時(shí)。對需要特殊培養條件的細菌,如需5%~10%CO2或厭氧條件等,應分別于CO2培養箱或厭氧培養箱中培養。
計數顯色培養基用法:
稱(chēng)取本品23.5克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至45-50℃待用;
傾注法:
取適當稀釋度的樣品液1ml加入無(wú)菌平皿中,再加入冷卻好的計數顯色培養基約15ml,混合均勻,待培養基*凝固后,36℃培養24~48h進(jìn)行計數;
涂布法:
取冷卻至45-50℃培養基,傾入無(wú)菌平皿,待培養基*凝固后,在36℃的培養箱中倒置放置1-2小時(shí),加入適當稀釋度的樣品液1ml,涂布于培養基上,36℃培養24~48h進(jìn)行計數。
操作步驟:
1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液;
2、取樣品液1ml加入冷卻至45-50℃顯色培養基中混勻或涂布于平板上;
3、36℃培養24~48h,選用有30~200個(gè)菌落的平板,計數顯色培養基的計數平板上出現的紅色菌落(不論其大小和顏色深淺均計數)。