觸酶試驗是關(guān)于觸酶的一個(gè)實(shí)驗做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶,但鏈球菌屬陰性,故常用此試驗來(lái)鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗,結核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽(yáng)性。
觸酶試驗酶液的制備:
1.稱(chēng)取葉片 0.25g ,加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min
離心15min取部分上清液經(jīng)適當稀釋后用于酶活性測定。
2.CAT活性的測定
在3ml的反應體系中,包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液
啟動(dòng)反應,測定波長(cháng)240nm處的OD降低速度。將每分鐘OD減少0.01定義為1個(gè)活力單位。
3.POD活性的測定
在3ml的反應體系中,包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈創(chuàng )木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml,最后加入0.05ml酶液?jiǎn)?dòng)反應,記錄470nm處OD增加速度。將每分鐘OD增加0.01定義為1個(gè)活力單位。
4. 用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量。